Folin-酚法測定蛋白質(zhì)含量實驗方法
實驗室較多用用Folin-酚法測定蛋白質(zhì)含量，肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白CElisa試劑盒此法的特點是靈敏度高，較雙縮脲高兩個數(shù)量級，較紫外法略高，操作稍微麻煩，反應(yīng)約在15分鐘有zui大顯色，并zui少可穩(wěn)定幾個小時，其不足之處是干擾因素較多，有較多種類的物質(zhì)都會影響測定結(jié)果的準確性。
【原 理】
蛋白質(zhì)中含有酚基的，可與酚試劑中的磷鉬鎢酸作用產(chǎn)生蘭色化合物，顏色深淺與蛋白含量成正比。
【操 作】
1、標準曲線的制備：
按下表操作，在試管中分別加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1ml蛋白標準溶液，用生理鹽水補足到1ml。肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白CElisa試劑盒加入5ml的堿性酮試劑，混勻后室溫放置20分鐘后，再加入0.5ml酚試劑混勻。
編 號 1 2 3 4 5 6 蛋白標準（ml） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 0.9% NaCl（ml） 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 堿性酮試劑（ml） 5 5 5 5 5 5 混勻后室溫(25℃)放置20分鐘 酚試劑（ml） 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 30分鐘后，以第1管為空白，在650nm波長比色，讀出吸光度，以各客的標準蛋白濃度為橫坐標，以其吸光度為縱坐標繪出標準曲線。
2、血清蛋白質(zhì)測定。
稀釋血清（或其它蛋白樣品濃度）：準確吸取0.1ml血清，置于50ml容量瓶中，用生理鹽水釋釋至刻度（此為稀釋500倍，其它蛋白樣品酌情而定）。再取三只試管，分別標以1、2、3號，按下表操作：
編 號 測定管 標準管 空白管 稀釋標本(ml) 0.2 — — 稀釋標準液(ml) — 0.2 — 0.9%NaCl(ml) — — 0.2 堿性酮液(ml) 1.0 1.0 1.0 混勻后于室溫放置20分鐘 酚試劑(ml) 0.1 0.1 0.1
混勻各管，30分鐘后，在波長650nm比色，讀取吸光度。
【計 算】
1、以測定管讀數(shù)查找標準曲線求得血清蛋白含量。
2、無標準曲線時，肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白CElisa試劑盒可以與測定管同樣操作的標準管按下式計算蛋白含量。
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