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細胞簡介：

大鼠表皮角化分離自皮膚組織；表皮位于動物皮膚的外層，由胚胎時期外胚層形成，具有抗摩擦和抗損傷的作用。表皮是皮膚的淺層結(jié)構(gòu)，由復(fù)層扁平上皮構(gòu)成。從基底層到表面可分為五層，即基底層、棘層、顆粒層、透明層和角質(zhì)層。表皮角化細胞（KC）是構(gòu)成表皮的主要細胞成分，在體內(nèi)處于不斷增殖過程中，分裂的角化細胞主要位于其基底層，少數(shù)位于棘細胞層。隨著向表層的推移，細胞的分化程度逐漸增加，并喪失分裂活性。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠表皮角化上皮先消化、后-膠原酶混合消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠表皮角化上皮經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-3代左右；2代以內(nèi)狀態(tài)好

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠白介素12(IL-12)檢測試劑盒 ，英文名： IL-12 ELISA Kit

Rabbit basic fibroblast growth factor (bFGF) ELISA Kit 兔子堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)檢測試劑盒

ELISA 小鼠瘦素(mouse Leptin)  進口分裝

CLIAKitforIL-27(MouseIerleukin27)ELISAKit小鼠白介素27

通用型球菌(Staphylococcusaureus)試劑盒20次

ELISAKitPDGF-BB大鼠血小板衍生生長因子BB

SPARC重組小鼠 Osteonectin / SPARC 蛋白 Protein

ANGPTL1/ANG-1 (Angiopoietin-like Protein 1 0.5mgANGPTL1/ANG-1 (Angiopoietin-like Protein 1) 血管位蛋白樣1/血管生成素樣蛋白-1抗原

AMPK重組人 AMPK (G1/B1/A1) Heterotrimer 蛋白 Protein

CAMK2B Protein Human 重組人 CAMK2B / CaMKII-beta 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

CD38 Protein Rat 重組大鼠 SCARB3 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

白血病抑制因子受體(LIFR)重組蛋白 Recombinant Leukemia Inhibitory Factor Receptor (LIFR)

CAMK2B Protein Human 重組人 CAMK2B / CaMKII-beta 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

CPA2重組小鼠 Carboxypeptidase A2 / CPA2 蛋白 Protein

IL6ST Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL6ST / gp130 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

EPHB2重組人 EphB2 / Hek5 蛋白 Protein

鴨病毒性腸病毒(DEV)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human ai-pl7-aibody (ai-cailage-Ab) ELISA Kit 人抗軟骨抗體(ai-cailage-Ab)檢測試劑盒

HumanEndotheliallipase,ELELISAKit 人內(nèi)皮脂肪酶(EL)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforACSELISAKit大鼠脂酰合成酶

亞甲基藍(METHYLENEBLUE)復(fù)染試劑盒50次

MouseplateletaibodiesIgG/M/A,PA-IgG/M/AELISAKit小鼠抗血小板抗體IgG/M/A(PA-IgG/M/A)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠表皮角化上皮細胞英文名稱：   Total Niic Oxide   規(guī)格：      英文縮寫：   NO

自然殺傷細胞   英文名稱：   Natural killer Cells   規(guī)格：      英文縮寫：   NK

桿菌抗體   英文名稱：   Mycobacterium Tuberculosis Aibody   規(guī)格：      英文縮寫：   TB

谷酰胺   英文名稱：   ansglaminase   規(guī)格：      英文縮寫：   TG

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。