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細(xì)胞簡介：

兔小梁網(wǎng)分離自眼球組織；小梁網(wǎng)由角膜基質(zhì)纖維、后界膜和角膜內(nèi)皮向后擴(kuò)展而成，覆蓋在鞏膜靜脈竇的內(nèi)側(cè)。小梁網(wǎng)細(xì)胞在眼內(nèi)壓調(diào)節(jié)中起著關(guān)鍵作用；小梁網(wǎng)細(xì)胞內(nèi)有特定的神經(jīng)遞質(zhì)和神經(jīng)肽受體，其中包括腎上腺素、乙酰和神經(jīng)肽Y。青光眼是由于眼內(nèi)壓力升高而造成的一種不可逆致盲眼病，小梁網(wǎng)細(xì)胞的體外培養(yǎng)是青光眼病因?qū)W研究的重要手段之一。在小梁網(wǎng)細(xì)胞中，一長串的血管活性多肽和生長因子能夠觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)機(jī)制，小梁網(wǎng)細(xì)胞可合成不同類型的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白以及金屬蛋白酶。形態(tài)學(xué)觀察可見，剛從組織塊長出的原代細(xì)胞，形態(tài)各異，多數(shù)呈星狀或不規(guī)則形。細(xì)胞有胞突，核橢圓形，胞體肥大，胞漿豐富，且可見吞噬顆粒。隨著細(xì)胞的增生及相互融合為單層，細(xì)胞的形態(tài)趨于一致。胞漿的色素顆粒及胞突消失，排列緊密呈類似上皮細(xì)胞的扁橢圓形或不規(guī)則形。胞體透亮，包膜清晰。

方法簡介：

實驗室分離的兔小梁網(wǎng)采用組織貼塊法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的兔小梁網(wǎng)經(jīng)NSE(神經(jīng)元特異性烯醇化酶)免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：梭形、多角形

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔小梁網(wǎng)體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠氧還原蛋白過氧化物酶4(PRDX4)檢測試劑盒

Hypoxia inducible factor 1 alpha (HIF-1 alpha) ELISA Kit 大鼠低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)檢測試劑盒

Human5-lipoxygenase,5-LO/LOXELISAKit 人5脂加氧酶(5-LO/LOX)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitfor15-LO/LOX(Mouse15-lipoxygenase)ELISAKit小鼠15脂加氧酶

飲料比色法定量檢測試劑盒20次

MouseLeptieceptor,LR/Ob-RELISAKit小鼠苗條素受體(LR/Ob-R)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

CDNF重組小鼠 CDNF / ARMETL1 蛋白 Protein

ADM R, Adrenomedullin receptor 腎上腺髓質(zhì)素受體(抗原 0.5mgADM R, Adrenomedullin receptor 腎上腺髓質(zhì)素受體(抗原)

CDK2AP2重組人 CDK2AP2 蛋白 Protein

IL1B Protein Human 重組人 IL-1 beta / IL1B 蛋白 (pro form, His 標(biāo)簽)

F11R Protein Rat 重組大鼠 JAM-A / F11R 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

ADM R, Adrenomedullin receptor 腎上腺髓質(zhì)素受體(抗原 0.5mgADM R, Adrenomedullin receptor 腎上腺髓質(zhì)素受體(抗原)

IL1B Protein Human 重組人 IL-1 beta / IL1B 蛋白 (pro form, His 標(biāo)簽)

CDNF重組小鼠 CDNF / ARMETL1 蛋白 Protein

F11R Protein Rat 重組大鼠 JAM-A / F11R 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

CDK2AP2重組人 CDK2AP2 蛋白 Protein

豚鼠巨噬細(xì)胞移動抑制因子(MIF)檢測試劑盒 ，英文名： MIF ELISA Kit

Human amyloid precursor protein (APP) ELISA Kit 人淀粉樣前體蛋白(βAPP)檢測試劑盒

MonkeyIerleukin1,IL-1ELISAKit白介素1(IL-1)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforBGP(Osteocalcin/BoneGla-protein)ELISAKit兔骨鈣素檢測試劑盒

細(xì)菌氫/ATP酶(H+/K+-ATPase)活性比色法定量檢測試劑盒20次

RabbitIerleukin9,IL-9ELISAKit兔子白介素9(IL-9)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔小梁網(wǎng)細(xì)胞乳酸（LD）測試盒（測全血）   Lactic acid (LD) test case (whole blood)

乳酸（LD）測試盒（測血清、組織等）   Lactic acid (LD) test case (serum, tissue, etc.)

乳酸脫氫酶（LDH）測試盒   Lactate dehydrogenase (LDH) test kit

蘋果酸脫氫酶測試盒（測血清）   Apple acid dehydrogenase test case (Ce Xueqing)

注意事項：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。