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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

豬脂肪間充質干分離自脂肪組織；脂肪組織主要由大量群集的脂肪細胞構成，聚集成團的脂肪細胞由薄層疏松結締組織分隔成小葉；貯存的脂肪，在需要時可迅速分解成甘油和脂肪酸，經血液輸送到各組織以供利用。它們影響胰島素敏感性、血壓水平、內皮功能、纖溶活動及炎癥反應，參與多種重要病理生理過程；脂肪組織已由過去單純作為能量儲存的器官而成為一個極其重要的內分泌系統(tǒng)。脂肪組織中也存在一些干細胞群，具有自我更新能力和多向分化潛能，被稱為脂肪組織來源的間充質干細胞，簡稱脂肪間充質干細胞。與骨髓間充質干細胞相比，在來源、細胞群特點以及分化潛能等多方面極為相似。但是，脂肪間充質干細胞更易獲得足夠數(shù)量的細胞，且獲取過程中對機體損傷更小，是更為理想的自體干細胞源。脂肪組織分離得到脂肪間充質干細胞以梭形為主要形態(tài)，BrdU可標記其細胞核。

方法簡介：

公司實驗室分離的豬脂肪間充質干采用膠原酶消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的豬脂肪間充質干經CD90免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產品：

大鼠白細胞介素1β(IL-1β)檢測試劑盒 ，英文名： IL-1β ELISA Kit

Mouse macrophage inflammatory protein 3 alpha (MIP-3 alpha /CCL20) ELISA Kit 小鼠巨噬細胞性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)檢測試劑盒

Mouseα1-microglobulin,α1-MGELISAKit 小鼠α1微球蛋白(α1-MG)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanOncogeneProteinp190/bcr-ablELISAKit人癌基因蛋白質p190/bcr-abl

同位素核酸蛋白結合反應試劑盒20次

sPECAM-1大鼠可溶性血小板內皮細胞粘附分子1

PLAU重組人 Urokinase / PLAU 蛋白 Protein

無翅型MMTV整合位點家族成員2(WNT2)重組蛋白 Recombinant Wingless Type MMTV Integration Site Family, Member 2 (WNT2)

IFNA2重組人 Interferon alpha 2 / IFNA2 蛋白 Protein

EFNB1 Protein Human 重組人 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (His & Fc 標簽)

HA Protein H9N2 重組甲型流感 H9N2 (A/Hong Kong/1073/99) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

無翅型MMTV整合位點家族成員2(WNT2)重組蛋白 Recombinant Wingless Type MMTV Integration Site Family, Member 2 (WNT2)

EFNB1 Protein Human 重組人 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (His & Fc 標簽)

PLAU重組人 Urokinase / PLAU 蛋白 Protein

HA Protein H9N2 重組甲型流感 H9N2 (A/Hong Kong/1073/99) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

IFNA2重組人 Interferon alpha 2 / IFNA2 蛋白 Protein

小鼠結蛋白(Des)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat ai ypsin (AT) ELISA Kit 大鼠抗(AT)檢測試劑盒

HumanCollectinELISAKit 人膠原凝集素(Collectin)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanai-cellmembraneDNAaibody,cmDNA檢測試劑盒人抗細胞膜DNA抗體(cmDNA)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物原生質細胞分離試劑盒5次

Humanα-Amylase，AMS/AMYELISAKit人α(AMS/AMY)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

豬脂肪間充質干細胞小鼠蛋白激酶B(PKB)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠血紅素氧合酶2(HO-2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISAKit   ELISA.   96T/48T